مسترمیکس سایبرگرین (SYBR Green qPCR mastermix)
مستر میکس PCR سایبرگرین یک محلول آماده است که برای انجام واکنش های PCR کمی (qPCR) مورد استفاده قرار میگیرد. این مستر میکس شامل تمام اجزای لازم برای انجام یک واکنش qPCR است، از جمله آنزیم Taq DNA پلیمراز، بافر واکنش، dNTPها، و رنگدانه فلورسنت سایبرگرین.
رنگ سایبرگرین به صورت غیراختصاصی به DNA دو رشته ای متصل میشود و با تکثیر DNA در طی PCR، شدت فلورسانس SYBR افزایش مییابد. این افزایش فلورسانس به صورت مستقیم با مقدار DNA تکثیر شده مرتبط است و امکان اندازهگیری کمی ماده ژنتیکی را فراهم میکند.
مستر میکس های سایبرگرین معمولاً با غلظت 2x عرضه میشوند و سازگار با انواع دستگاه های Real-Time PCR هستند. این مستر میکس ها میتوانند برای تشخیص کمی بر اساس رنگ فلورسنت متصل شونده به DNA، تکثیر نوکلئیک اسید و بررسی پروفایل بیانی ژنها استفاده شوند.
برخی از مستر میکس های سایبرگرین فاقد ROX هستند، که این امکان را فراهم میکند تا کاربر بتواند این رنگ مرجع را به میزان دلخواه و بر اساس نیاز واکنش خود در دستگاه های qPCR که نیاز به حضور ROX دارند، اضافه کند.
استفاده از مستر میکس های سایبرگرین به دلیل سهولت در استفاده و کاهش خطای انسانی در آماده سازی واکنش ها، در آزمایشگاه های ژنتیک و مولکولی محبوبیت زیادی دارد. فقط کافی است نمونه و پرایمرها را به مستر میکس اضافه کرده و واکنش را شروع کنید.
در Real-time PCR، که به عنوان PCR کمی (qPCR) نیز شناخته می شود، مسترمیکس اصلی یک محلول از پیش مخلوط شده است که شامل تمام اجزای لازم برای واکنش qPCR، به جز DNA الگو و پرایمرها است. ترکیب اصلی برای ریل تایم PCR معمولاً: بافر، dNTPs (دی‌اکسی‌نوکلئوتید تری فسفات‌ها)، DNA پلیمراز همراه با رنگ یا پروب متصل به DNA و سایر افزودنی‌ها یا تثبیت‌کننده‌ها است. (میکس های اصلی مختلف برای تکنیک ریل تایم PCR ممکن است حاوی انواع مختلفی از رنگ ها یا پروب های متصل شونده به DNA باشند که هر کدام ویژگی ها و مزایای منحصر به فردی دارند و در طول هر چرخه تکثیر به DNA تازه سنتز شده متصل میشود. این رنگ یا کاوشگر فلورسانس را متناسب با مقدار DNA موجود در واکنش ساطع می کند و امکان نظارت در زمان واقعی تقویت DNA را فراهم می کند. به عنوان مثال، برخی از مخلوط های اصلی از رنگ‌های intercalating استفاده میکنند که به DNA دو رشته‌ای متصل میشوند، در حالی که برخی دیگر از پروب‌های TaqMan یا فانوس‌های مولکولی خاص برای دنباله هدف استفاده میکنند.) ترکیب اصلی برای ریل تایم PCR برای تعیین کمیت دقیق و حساس اسیدهای نوکلئیک در یک نمونه بهینه شده است.
استفاده از میکس اصلی در qPCR فرآیند راه اندازی را ساده می کند، خطر خطاهای پیپت را کاهش می دهد و تضمین می کند که تمام اجزای لازم در غلظت های صحیح برای عملکرد بهینه qPCR وجود دارند. با ارائه یک مخلوط واکنش استاندارد و سازگار، میکس اصلی به بهبود دقت، حساسیت و تکرارپذیری نتایج qPCR کمک میکند. مانند مخلوط های اصلی PCR استاندارد، رعایت دستورالعمل های سازنده برای ذخیره سازی، جابجایی و تنظیم واکنش هنگام استفاده از میکس اصلی برای qPCR بسیار مهم است. نگهداری و جابجایی مناسب ترکیب اصلی برای حفظ پایداری و عملکرد اجزا در واکنش های متعدد بسیار مهم است.
سایبرگرین
سایبرگرین یک رنگ فلورسانسی است که در روش ریل تایم PCR برای تشخیص و اندازه گیری کمیت توالی های DNA استفاده میشود. این رنگ زمانی که به DNA دو رشته ای متصل شود، میزان فلورسانس قویتری از خود ساطع میکند و با افزایش محصولات PCR، شدت نور فلورسانس نیز افزایش مییابد. با اندازه گیری شدت نور فلورسانس در انتهای هر سیکل از PCR، میتوان منحنی حاصل را با یک منحنی استاندارد مقایسه کرد و غلظت DNA هدف را سنجید. برای استفاده از سایبرگرین در روش ریل تایم PCR، معمولاً از مسترمیکس های آماده که شامل آنزیم DNA پلیمراز، بافر، dNTP ها و سایبرگرین هستند، استفاده میشود. سایبرگرین یک رنگ فلورسانسی است که وقتی به DNA دو رشته ای متصل میشود، میزان تابش نور فلورسانس آن افزایش مییابد. این رنگ با جذب فوتون های نور آبی یا فرابنفش به حالت برانگیخته میرود و سپس با انتشار فوتون های نور سبز به حالت پایه برمیگردد. این فرآیند به صورت سریع و بدون تغییر در ساختار مولکول رخ میدهد.
برای استفاده از سایبرگرین در روش ریل تایم PCR، که یک تکنیک برای کپی کردن و اندازه گیری کمیت DNA است، معمولاً از مسترمیکس های آماده که شامل آنزیم DNA پلیمراز، بافر، dNTP ها و سایبرگرین هستند، استفاده میشود. در طول واکنش PCR، با تولید آمپلیکون های جدید از DNA هدف، مقدار سایبرگرین متصل شده به DNA دو رشته ای افزایش مییابد و در نتیجه شدت نور فلورسانس نیز بالاتر میرود. با اندازه گیری شدت نور فلورسانس در انتهای هر سیکل از PCR، میتوان منحنی حاصل را با یک منحنی استاندارد مقایسه کرد و غلظت DNA هدف را سنجید. سایبرگرین در تست های دیگری نیز استفاده میشود. برخی از این تست ها عبارتند از:
• رنگ آمیزی ژل آگاروز برای تشخیص و اندازه گیری
• رنگ آمیزی سلول های زنده برای بررسی سلامت و آپوپتوز
• رنگ آمیزی میتوکندری برای ارزیابی فعالیت و پتانسیل الکتریکی آن
• رنگ آمیزی کروموزوم ها برای تعیین تعداد و ساختار آنها
استفاده از مستر میکس سایبرگرین در آزمایشگاه های مولکولی به دلایل زیر محبوب است:
1. حساسیت بالا: سایبرگرین به DNA دو رشته ای متصل شده و با افزایش میزان DNA، فلورسانس بیشتری ساطع میکند، که این امر حساسیت بالایی در تشخیص و کمیسازی DNA فراهم میآورد.
2. سادگی استفاده: مستر میکس های سایبرگرین حاوی تمام اجزای لازم برای انجام واکنش qPCR هستند، که این امر سهولت و سرعت بخشیدن به روند آزمایش را به همراه دارد.
3. کاهش خطای انسانی: با استفاده از مستر میکس، خطای ناشی از اضافه کردن جداگانه هر یک از اجزای واکنش کاهش مییابد.
4. کاهش آلودگی متقاطع: از آنجا که مستر میکس به صورت از پیش ترکیب شده است، خطر آلودگی متقاطع بین نمونه ها کمتر میشود.
5. انعطافپذیری: مستر میکسهای سایبرگرین میتوانند برای تشخیص و اندازهگیری کمیت توالیهای اختصاصی RNA و DNA در آزمایشهای مختلف مورد استفاده قرار گیرند.
6. پایداری در دماهای مختلف: سایبرگرین در دماهای مختلف پایدار است و میتوان از آن در واکنشهای بیوشیمیایی متفاوت استفاده کرد.
این ویژگیها مستر میکس سایبرگرین را به یک انتخاب مطلوب برای آزمایشهای مولکولی تبدیل کردهاند. این مستر میکسها به تحقیقات و تشخیصهای دقیق در زمینههای ژنتیک و بیومولکولی کمک شایانی میکنند.
نگاه کلی
برخی از مخلوط‌های اصلی مسترمیکس ممکن است حاوی مواد افزودنی مانند تثبیت‌کننده‌ها یا تقویت‌کننده‌ها برای بهبود کارایی واکنش PCR یا قوی‌تر کردن آن در حضور مهارکننده‌ها یا شرایط واکنش غیربهینه باشند. هنگام استفاده از میکس اصلی در PCR، پیروی از دستورالعمل های سازنده برای ذخیره سازی، جابجایی و تنظیم واکنش برای اطمینان از عملکرد بهینه بسیار مهم است. همچنین توصیه میشود که مخلوط اصلی را به حجم‌های یک‌بار مصرف تقسیم کنید تا خطر آلودگی و تخریب اجزا در چرخه‌های متعدد انجماد و ذوب به حداقل برسد. به طور کلی، ترکیب اصلی در PCR نقش مهمی در ساده‌سازی و استاندارد کردن فرآیند PCR ایفا میکند که منجر به نتایج سازگارتر و قابل اعتمادتر در تحقیقات زیست‌شناسی مولکولی، تشخیص و سایر کاربردها میشود. شما میتوانید برای مشاوره در تست های مولکولی و خرید مواد مصرفی و انواع دستگاه های مولکولی با مشاوران ما در شرکت ماناتک در تماس باشید.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.