محتوای اصلی PCR یک محلول از پیش آماده شده است که حاوی تمام معرف های مورد نیاز برای انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) است. این شامل آنزیم پلیمراز، دئوکسی ریبونوکلئوتید تری فسفات ها (dNTPs)، MgCl2 و بافر است. مسترمیکس اصلی معمولاً در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شود و می توان از آن برای انجام چندین واکنش PCR استفاده کرد. دئوکسی ریبونوکلئازDNA پلیمراز: آنزیمی که پلیمریزاسیون تری فسفات های دئوکسی نوکلئوتید (dNTPs) را کاتالیز می کند تا یک رشته DNA مکمل یک رشته DNA الگو را تشکیل دهد. دنوکلئوتیدها: بلوک های سازنده DNA از جمله dATP، dCTP، dGTP و dTTP. آغازگرها: توالی های DNA کوتاهی که به نواحی خاصی از DNA الگو متصل می شوند و نقطه شروع و پایان سنتز DNA را مشخص می کنند. بافر: محلولی که pH و قدرت یونی مخلوط واکنش را حفظ می کند و فعالیت DNA پلیمراز را بهینه می کند. MgCl2 : کوفاکتوری که برای فعالیت DNA پلیمراز ضروری است.
چرا از PCR Master Mix استفاده کنیم؟
استفاده از ترکیب اصلی PCR مزایای متعددی دارد، از جمله: راحتی: مخلوط اصلی PCR یک محلول از پیش آماده شده است که حاوی تمام معرف های لازم است، بنابراین نیازی به اندازه گیری اجزای جداگانه نیست. دقت: ترکیب اصلی PCR برای فراهم کردن شرایط بهینه برای PCR فرموله شده است که می تواند به بهبود دقت نتایج کمک کند. تکرارپذیری: ترکیب اصلی PCR را می توان برای انجام چندین واکنش PCR با نتایج ثابت استفاده کرد. کارایی: مخلوط اصلی PCR می تواند با حذف نیاز به آماده سازی معرف های جداگانه برای هر واکنش، در زمان و تلاش صرفه جویی کند.
کاربردهای PCR Master Mixes
مستر میکس های اصلی PCR به طور گسترده در کاربردهای مختلف تحقیقاتی و تشخیصی استفاده می شود، از جمله: تقویت ژنوم: تکثیر مناطق خاصی از DNA ژنومی برای تجزیه و تحلیل تغییرات ژنتیکی، تغییرات تعداد کپی و بیان ژن. توالی یابی DNA: تقویت قطعات DNA برای توالی یابی بعدی با استفاده از پلتفرم های توالی یابی نسل بعدی (NGS). تشخیص جهش: تقویت نواحی خاص DNA برای تشخیص جهش های ژنتیکی مرتبط با بیماری ها یا مقاومت دارویی. شبیه سازی DNA: تکثیر قطعات DNA برای شبیه سازی در وکتورها برای مطالعه یا بیان بیشتر. کاربردهای پزشکی قانونی: تکثیر نمونه های DNA از صحنه های جرم یا سایر تحقیقات پزشکی قانونی.
نحوه استفاده از PCR Master Mix
برای استفاده از ترکیب اصلی PCR، کافی است DNA الگو و پرایمرهای مناسب را به مخلوط اصلی اضافه کنید. سپس مخلوط تا دمای دناتوراسیون حرارت داده می شود تا رشته های DNA از هم جدا شوند، تا دمای بازپخت سرد می شود تا پرایمرها به DNA متصل شوند و تا دمای گسترش حرارت داده می شود تا آنزیم پلیمراز بتواند DNA جدید را سنتز کند.
هنگام استفاده از ترکیب اصلی PCR باید چند فاکتور را در نظر گرفت، از جمله:
نوع آنزیم پلیمراز: نوع آنزیم پلیمراز مورد استفاده در میکس اصلی می تواند بر ویژگی و حساسیت واکنش PCR تأثیر بگذارد. غلظت dNTP ها: غلظت dNTP ها در ترکیب اصلی می تواند بر سرعت سنتز DNA تأثیر بگذارد. غلظت MgCl2: غلظت MgCl2 در مخلوط اصلی می تواند بر فعالیت آنزیم پلیمراز تأثیر بگذارد. pH بافر: pH بافر در مخلوط اصلی می تواند بر فعالیت آنزیم پلیمراز تأثیر بگذارد.
برند های PCR Master Mixes
شرکت های متعددی مخلوط های اصلی PCR را تولید می کنند و هر برند ممکن است فرمولاسیون و شرایط نگهداری کمی متفاوت داشته باشد. رعایت دقیق دستورالعمل های سازنده برای ذخیره سازی و استفاده برای اطمینان از یکپارچگی محصول بسیار مهم است. برخی از مارک های محبوب میکس های اصلی PCR عبارتند از:
Thermo Fisher Scientific
Qiagen
Roche
Eurofins
New England Biolabs
Ampliqon
شرایط و نکات نگهداری مستر میکس های PCR
مستر میکس های PCR معمولاً در دمای 20- یا 80- درجه سانتیگراد ذخیره می شوند تا پایداری اجزای خود را حفظ کرده و از تخریب جلوگیری کنند. پس از ذوب، مسترها باید بلافاصله استفاده شوند یا در دمای 4 درجه سانتیگراد تا 24 ساعت نگهداری شوند. از تکرار چرخه های انجماد و ذوب باید اجتناب شود، زیرا می تواند به معرف ها آسیب برساند و بر عملکرد واکنش PCR تأثیر بگذارد. برای اطمینان از کیفیت و عملکرد میکس اصلی PCR، نکات زیر را دنبال کنید: مستر میکس های اصلی را در بسته بندی اصلی خود نگهداری کنید تا در برابر نور و رطوبت محافظت شوند. از یک پیپت تمیز و استریل برای پخش مستر استفاده کنید. برای به حداقل رساندن خطر آلودگی از پیپت کردن بیش از حد خودداری کنید. از ورتکس مستر میکس خودداری کنید، زیرا می تواند باعث ایجاد حباب های هوا شود که می تواند در واکنش PCR اختلال ایجاد کند. اگر نیاز به ذخیره بخشی از مخلوط اصلی ذوب شده دارید، آن را به حجم های کوچکتر تقسیم کنید و در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری کنید. با پیروی از این دستورالعمل ها، می توانید با اطمینان از مخلوط های اصلی PCR برای به دست آوردن نتایج قابل اعتماد و قابل تکرار در آزمایش های زیست شناسی مولکولی خود استفاده کنید.
کلام آخر
مسترمیکس های PCR به دلیل راحتی، دقت و تکرارپذیری به ابزارهای ضروری برای تحقیقات و تشخیص زیست شناسی مولکولی تبدیل شده اند. آنها گردش کار PCR را ساده می کنند، خطر خطا را کاهش می دهند و نتایج ثابت را تضمین می کنند. همانطور که فناوری PCR به پیشرفت خود ادامه می دهد، مسترمیکس های PCR احتمالا نقش مهم تری را در قادر ساختن محققان به مطالعه اساس مولکولی زندگی و توسعه ابزارهای تشخیصی و درمانی جدید ایفا خواهند کرد. شما عزیزان میتوانید جهت دریافت اطلاعات بیشتر و خرید دستگاه ترمال سایکلر و همچنین برای مشاوره انواع تست های مولکولی و خرید انواع مواد مولکولی با کارشناسان ما در شرکت مانا تک در تماس باشید.
