انواع ستون های استخراج

ستون های استخراج: معرفی و کلیات

• ستون های استخراج ابزارهایی هستند که برای جداسازی و خالص سازی اسید نوکلئیک از نمونه های بیولوژیکی استفاده می شوند. این ستون ها معمولاً از یک غشای ژل سیلیکا تشکیل شده اند که قادر به اتصال اسید نوکلئیک به خود در شرایط خاصی است.
• ستون های استخراج DNA ژنومی با ستون های اسپین و لوله های جمع آوری عرضه می شوند. این ستون ها استخراج سریع و مطمئن DNA با کیفیت بالا را از نمونه های مختلف از جمله بافت ها، سلول ها، گیاهان و خون با ظرفیت اتصال تا 30 میکروگرم فراهم می کند.ستون ها از غشای سیلیکا با خلوص و کیفیت بالا ساخته شده اند که عمر طولانی ستون و عملکرد بالای DNA را تضمین می کند و از جنس پلاستیک مواد بازیابی نیستند، که اطمینان حاصل می کند که مشتری می تواند DNA با بازده بالا و خلوص بالا را دریافت کند.
• برای استفاده از این ستون ها، نمونه را با یک بافر مناسب مخلوط کرده و به ستون اضافه می کنیم. سپس ستون را در یک سانتریفیوژ قرار داده و بافر را جدا می کنیم. در این حالت، اسید نوکلئیک به غشای ژل سیلیکا متصل می شود و ناخالصی ها با بافر خارج می شوند. بعد از چندین مرحله شستشو، اسید نوکلئیک را با یک بافر الوشن (elution) از غشای ژل سیلیکا جدا کرده و در یک لوله جمع آوری می کنیم.
• DNA استخراج شده برای استفاده در بسیاری از کاربردهای پایین دستی، از جمله PCR، هضم محدود، توالی یابی و ساخت کتابخانه آماده است.

مشخصات ستون‌های اسپین

•  Spin Column به طور ویژه برای استفاده در خالص سازی، جداسازی اسیدهای نوکلئیک تولید می شوند و دارای طیف متنوعی از کاربردها هستند که از DNA تا RNA، پلاسمید گرفته تا DNA ویروسی و ژنومی، پلاسمای سرم، بافت و خون کامل و همچنین خالص سازی منظم PCR تا آماده سازی نمونه توالی یابی نسل بعدی شروع می شود. این می تواند به جداسازی پلاسمید، استخراج DNA ژل آگارز، تخلیص محصولPCR، پاکسازی پس از هضم آنزیمی و خالص سازی اسید نوکلئیک کمک کند.
• ستون ها از مواد مخصوص ساخته شده اند و تقریباً هیچ اتصالی به اسیدهای نوکلئیک نشان نمی دهد. حداقل ضخامت آن 0.3 میلی متر است که آن را به یک جزء ایده آل برای خالص سازی اسید نوکلئیک تبدیل می کند.

انواع کاربرد ستون ها:

کاربرد این ستون ها برای پژوهش های ژنتیک و بیوتکنولوژی است که نیاز به خالص سازی اسید نوکلئیک دارند. برخی از کاربردهای ممکن عبارتند از:

• تشخیص و شناسایی ویروس ها، باکتری ها، قارچ ها و دیگر عوامل عفونی
• تعیین رابطه فیلوژنتیک و تنوع ژنتیک موجودات زنده
• بررسی بروز مقاومت به آنتی بیوتیک ها، داروها و شرایط محیطی
• کشف و تعداد نسخ ژن های مورد علاقه در بافت ها و سلول ها
• تولید مولکول های با قابلیت های جدید با استفاده از روش های مهندسی ژنتیک
• تشخیص بیماری های ژنتیک و ارثی در افراد و جمعیت ها

انواع مختلف ستون های چرخشی

1. 1. ستون چرخش غشای سیلیسی: که در بالا خدمت شما معرفی شد.
2. 2. ستون چرخش تبادل آنیونی:

این ستون های چرخشی به تصفیه DNA پلاسمید درجه ترانسفکشن کمک می کنند. برخی از ویژگی های ستون های اسپین تبادل آنیونی عبارتند از:

• سریع و ساده: طراحی چرخشی مبتنی بر غشاء، بسته بندی ستون را حذف می کند.
• راحت و منعطف: فرمت گریز از مرکز، مدیریت مفید نمونه های مختلف را به صورت موازی امکان پذیر می کند.
• مقاوم: این ها ترک نمی خورند یا خشک نمی شوند.
• حجم بستر کم: کار با حجم بافر کم به دلیل حجم کم بستر جاذب غشایی امکان پذیر است که منجر به بخش های شستشوی متمرکز می شود.

3. 3. ستون چرخش مبتنی بر کاغذ فیلتر:

کاغذ فیلتر ساخته شده از الیاف سلولز یک جایگزین بالقوه برای مواد سیلیکا در یک ستون چرخشی برای تصفیه با توان بالا است. همچنین مشخص شده است که از نوک کاغذ صافی می توان برای خالص سازی سریع اسیدهای نوکلئیک از عصاره های خام برای تجزیه و تحلیل PCR استفاده کرد. کاغذ صافی مبتنی بر سلولز مقرون به صرفه است و به راحتی در آزمایشگاه در دسترس است. از این رو، کاغذ صافی می تواند به طور متنوعی برای تصفیه اسید نوکلئیک فاز جامد استفاده شود.

4. 4. ستون چرخش فیبر شیشه ای:

اینها انواع ستون اسپینی هستند که هم برای DNA ژنومی و خالص سازی DNA پلاسمید و هم برای خالص سازی RNA استفاده می شود. ستون‌های اسپین فیبر شیشه‌ای می‌توانند نمونه‌های اسید نوکلئیک را با هدررفت ناچیز نگه دارند، در حالی که به طور همزمان نمک‌ها و سایر مولکول‌های کوچک‌تر را به طور موثر حذف می‌کنند. این امر منجر به بازدهی بالا در نمونه و نتایج قابل تکرار برای فرآیندهای پایین دستی می شود.

5. 5. ستون چرخش فیلتر پلی اتیلن:

این نوع ستون های اسپین برای فیلتراسیون درشت همراه با حذف ذرات، مناسب هستند. این ستون های چرخشی می توانند به عنوان یک مرحله پیش فیلتراسیون و به عنوان یک فیلتر پشتیبانی شده در ارتباط با سایر فیلترها نیز مورد استفاده قرار گیرند. فیلترهای پلی اتیلن آبگریز بوده و از نظر حرارتی پایدار بوده و مقاومت شیمیایی بالایی دارند. این فیلترها می توانند قلیایی ها، اسیدهای غلیظ و طیف وسیعی از حلال های آلی را تحمل کنند.

مراحل تخلیص بر مبنای ستون ها

تخلیص اسید نوکلئیک مبتنی بر ستون چرخشی به عنوان یک روش استخراج فاز جامد برای خالص‌سازی سریع اسیدهای نوکلئیک تعریف می‌شود. این فرآیند به این واقعیت بستگی دارد که اسیدهای نوکلئیک در شرایط خاص تمایل به اتصال به فاز جامد سیلیس دارند. این فرآیند اساساً شامل 4 مرحله است:

• لیز سلول ها:

نمونه های سلولی با “روش لیتیک” درمان می شوند که شامل شکستن غشای سلولی و حذف اسید نوکلئیک است.

• اتصال اسید نوکلئیک به غشای سیلیکاژل:

محلول اتصال (بافر + اتانول / ایزوپروپانول) به یک ستون اسپین منتقل می شود و سپس ستون در داخل یک سانتریفیوژ قرار می گیرد که به نوبه خود محلول اتصال را از طریق غشای سیلیکاژل که در داخل اسپین قرار دارد، وادار می کند. ستون با در نظر گرفتن بهینه pH و غلظت نمک محلول اتصال، اسید نوکلئیک تمایل به اتصال به غشای سیلیکاژل با عبور محلول از آن دارد.

• شستشوی اسید نوکلئیک متصل به غشاء سیلیکاژل:

 در این مرحله جریان از بین رفته و یک بافر شستشو به ستون چرخش اضافه می شود. ستون چرخش دوباره در داخل سانتریفیوژ قرار می گیرد و بافر شستشو را مجبور به عبور از غشاء می کند. این امر حذف هرگونه ناخالصی باقیمانده از غشاء را تضمین می کند و فقط اسید نوکلئیک را به سیلیکا ژل متصل می کند.

بیشتر بخوانید:مشاوره خرید دستگاه ریل تایم PCR

• شستشوی اسید نوکلئیک:

سپس بافر شستشو جایگزین می شود و یک بافر شستشو (یا به سادگی آب) در ستون چرخش قرار می گیرد. ستون چرخش مجدداً در سانتریفیوژ قرار می گیرد و بافر شستشو را مجبور به عبور از غشاء می کند. بافر شستشو، اسید نوکلئیک را از غشای سیلیسی جدا می کند و اسید نوکلئیک از پایه ستون جمع آوری می شود.

ستون های استخراج  RNA

ستون های استخراج RNA با ستون های اسپین و لوله های جمع آوری عرضه می شوند. این ستون ها استخراج سریع و مطمئن RNA با کیفیت بالا از بافت ها، سلول ها، گیاهان و خون را با ظرفیت اتصال 20 میکروگرم فراهم می کنند.

کاربردها

• خالص سازی RNA از سلول، بافت کشت شده

       RNA از 10⁹ سلول باکتریایی (گرم منفی، گرم مثبت) یا کمتر از 10⁸ سلول مخمر

• RNA از ≤100 میکرولیتر مایعات بیولوژیکی
• پاکسازی RNA از مخلوط واکنش
• RNA خالص مناسب برای RT-PCR زمان واقعی، نورترن بلات، گسترش پرایمر، فناوری آرایه، سنجش حفاظت RNase و غیره.

جزئیات

• فناوری: تکنولوژی غشای سیلیسی
• فرمت: ستون چرخش کوتاه
• تا 20 میکروگرم RNA با خلوص بالا
• ظرفیت اتصال: یکپارچگی خوب و خلوص بالا
• کیفیت بالا با بازدهی قابل تکرار

امتیازات

• می تواند سانتریفیوژ با سرعت بالا را تحمل کند
• جذب کم به اسیدهای نوکلئیک
• حجم خالی بسیار کم

ستون های استخراج DNA

ستون های استخراج DNA با ستون های چرخشی و لوله های جمع آوری عرضه می شوند. این ستون ها استخراج سریع و مطمئن DNA با کیفیت بالا را از نمونه های مختلف از جمله بافت ها، سلول ها، گیاهان و خون با ظرفیت اتصال 20 میکروگرم فراهم می کند.

ویژگی ها:

• تا 20 میکروگرم DNA ژنومی
• اندازه قطعات بزرگ و خلوص بالا
• بازدهی با کیفیت و قابل تکرار
• مناسب برای انواع بسیاری از نمونه ها

رنگ رینگ ها در داخل ستون ها به صورت قراردادی بوده و ثابت نمی باشد. این رینگ در شرکت های مختلف متفاوت می باشد، اگر به دنبال مورد خاصی از ستون ها میباشید، باید در ویژگی های ستون های شرکت های مختلف جستجو کنید و نه به دنبال رنگ ها باشید. برای دریافت اطلاعات تخصصی میتوانید با  کارشناسان ما در ماناتک تماس حاصل فرمایید.