مسترمیکس ریل تایم پروب روش Taqman
مستر میکس TaqMan یک محلول آماده و از پیش ترکیب شده است که برای انجام واکنشهای زنجیرهای پلیمراز (PCR)، به ویژه در روشهای کمیسازی مولکولی مانند qPCR یا RT-qPCR، استفاده میشود. این مستر میکس شامل تمام اجزای لازم برای انجام یک واکنش PCR است، از جمله:
• آنزیم Taq DNA پلیمراز: که برای سنتز زنجیره های جدید DNA از تمپلت های موجود استفاده میشود.
• dNTPها: مولکولهای نوکلئوتیدی که بلوک های ساختمانی DNA را تشکیل میدهند.
• بافر واکنش: که شرایط pH و یونی مناسب برای فعالیت آنزیم را فراهم میکند.
• MgCl2: یک کوفاکتور مهم که برای فعالیت آنزیم Taq DNA پلیمراز ضروری است.
• پروبهای TaqMan: که حاوی یک رنگدانه فلورسنت هستند و به تشخیص و کمیسازی محصولات PCR کمک میکنند.
استفاده از مستر میکس TaqMan در آزمایشگاه های مولکولی مزایای متعددی دارد، از جمله کاهش خطای انسانی، صرفه جویی در زمان، و کاهش خطر آلودگی متقاطع، زیرا نیازی به اضافه کردن جداگانه هر یک از اجزای واکنش نیست.این مستر میکس ها به صورت تجاری در دسترس هستند و میتوانند به صورت مایع یا خشک (لیوفیلیزه) نگهداری شوند.
مسترمیکس ریل تایم پروب روش Taqman یک محلول است که شامل بسیاری از اجزای لازم برای انجام تست ریل تایم PCR با استفاده از پروب Taqman است. تست ریل تایم PCR یک تکنیک است که برای کپی کردن و اندازه گیری کمیت DNA هدف در زمان واقعی استفاده میشود. در ریل تایم PCR، مستر میکس‌های اصلی پروب TaqMan محلول‌های تخصصی هستند که برای واکنشهای کمی PCR (qPCR) طراحی شده‌اند که از پروبهای TaqMan برای تشخیص هدف استفاده میکنند. کاوشگرهای TaqMan پروب های الیگونوکلئوتیدی دارای نشاندار دوگانه هستند که حاوی یک رنگ فلورسنت و یک مولکول خاموش کننده هستند. این کاوشگرها با توالی DNA هدف هیبرید می شوند و توسط DNA پلیمراز در طول تقویت شکاف می شوند و منجر به آزاد شدن فلورسانس می شوند که می تواند در زمان واقعی شناسایی شود. مستر میکس های اصلی پروب TaqMan معمولاً حاوی تمام اجزای لازم برای یک واکنش ریل تایم PCR هستند، از جمله بافر، dNTPs (دی اکسی نوکلئوتید تری فسفات ها)، DNA پلیمراز، پروب های TaqMan مخصوص توالی هدف، و سایر افزودنی ها یا تثبیت کننده ها. کاوشگرهای TaqMan در ترکیب اصلی برای بازپخت کردن توالی DNA هدف با ویژگی و حساسیت بالا طراحی شده‌اند که امکان تعیین کمیت دقیق DNA هدف در نمونه را فراهم میکند.
هنگامی که پروب TaqMan در طول واکنش qPCR به DNA هدف متصل می شود، DNA پلیمراز پرایمر را گسترش می دهد و پروب را می شکافد و سیگنال فلورسنت را آزاد می کند. فلورسانس ساطع شده متناسب با مقدار DNA هدف موجود در واکنش است و امکان نظارت در زمان واقعی تقویت و تعیین کمیت DNA را فراهم می کند. استفاده از ترکیب اصلی پروب TaqMan در ریل تایم PCR فرآیند راه اندازی را ساده می کند، ویژگی و حساسیت سنجش را افزایش می دهد و کمیت دقیق DNA هدف را فراهم می کند. با ترکیب پروب های TaqMan به طور مستقیم در ترکیب اصلی، محققان می توانند گردش کار qPCR را ساده کرده و خطر خطاهای پیپت یا آلودگی را به حداقل برسانند.
Taqman پروب
پروب Taqman یک قطعه کوتاه از DNA است که شامل یک رنگ فلورسانس در انتهای ۵ پرایم و یک ماده خاموش کننده نور در انتهای ۳ پرایم است. این پروب طوری طراحی میشود که مکمل یک قسمت از DNA هدف باشد. در طول واکنش PCR، آنزیم Taq DNA Polymerase با خاصیت Exonuclease Activity ۵ پرایم پروب را تجزیه میکند و رنگ فلورسانس را آزاد میکند. با افزایش محصول PCR، شدت نور فلورسانس نیز بالاتر میرود و با دستگاه ریل تایم PCR قابل اندازه گیری است. پروب Taqman یک قطعه کوتاه از DNA است که شامل یک رنگ فلورسانس در انتهای ۵ پرایم و یک ماده خاموش کننده نور در انتهای ۳ پرایم است. این پروب طوری طراحی میشود که مکمل یک قسمت از DNA هدف باشد. برای ساخت پروب Taqman، معمولاً از روشهای زیر استفاده میشود:
• سنتز شیمیایی: در این روش، پروب Taqman با استفاده از دستگاههای سنتز DNA و با الحاق رنگ فلورسانس و ماده خاموش کننده به ترتیب در انتهای ۵ و ۳ پرایم ساخته میشود. این روش سریع، دقیق و قابل تکرار است، اما هزینه بالا و نیاز به تجهیزات خاص دارد.
• سنتز زیستی: در این روش، پروب Taqman با استفاده از فعالیت PCR و با استفاده از پرایمرهای دارای رنگ فلورسانس و ماده خاموشکننده در انتهای ۵ و ۳ پرایم ساخته میشود. این روش کم هزینه، ساده و قابل تطبیق با DNA هدف مختلف است، اما نیاز به بهینه سازی شرایط PCR و کنترل کیفی دارد.
پروبهای TaqMan در روش PCR کمی (qPCR) به این صورت عمل میکنند:
1. طراحی پروب: پروبهای TaqMan به گونهای طراحی میشوند که شامل یک رنگدانه گزارشدهنده (Reporter) در انتهای ۵’ و یک ماده خاموش کننده (Quencher) در انتهای ۳’ هستند.
2. انجام واکنش PCR: در طول واکنش PCR، پروب TaqMan به ناحیه مورد نظر از DNA تمپلت متصل میشود.
3. فعالیت اگزونوکلئازی: هنگامی که آنزیم Taq DNA پلیمراز در حین سنتز زنجیره جدید DNA به پروب میرسد، به دلیل فعالیت ۵’ اگزونوکلئازی خود، پروب را تجزیه میکند.
4. تولید سیگنال فلورسنت: با تجزیه پروب، رنگدانه گزارشدهنده از ماده خاموشکننده جدا شده و سیگنال فلورسنت تولید میکند. این سیگنال توسط دستگاه qPCR قابل اندازهگیری است.
5. کمیسازی: با هر چرخه PCR، مقدار DNA تمپلت افزایش مییابد و در نتیجه، سیگنال فلورسنت بیشتری تولید میشود که این امر امکان کمیسازی مقدار DNA را فراهم میآورد.
این روش به دلیل دقت بالا و حساسیت زیاد در تشخیص و کمیسازی DNA هدف، در تحقیقات ژنتیکی و تشخیص پزشکی کاربرد فراوانی دارد.
نگاه کلی
به طور کلی، میکس های اصلی پروب TaqMan ابزارهای ارزشمندی برای محققانی هستند که سنجش های کمی PCR را انجام می دهند که به حساسیت، ویژگی و دقت بالا در اندازه گیری فراوانی اهداف DNA خاص در نمونه های بیولوژیکی نیاز دارد. شما میتوانید برای مشاوره در تست های مولکولی و خرید مواد مصرفی و انواع دستگاه های مولکولی با مشاوران ما در شرکت ماناتک در تماس باشید.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.