دستگاه روتورجین 5 کاناله (Rotor-Gene Q 5 Plex HRM) یک دستگاه ریل تایم PCR همه کاره و با کارایی بالا است که برای طیف وسیعی از کاربردها در تنظیمات تحقیقاتی و تشخیصی مناسب است. قابلیت مالتی پلکس، تجزیه و تحلیل ذوب با وضوح بالا و نرم افزار کاربر پسند آن را به ابزاری ارزشمند برای دانشمندانی تبدیل کرده است که به دنبال دستیابی به نتایج دقیق و کارآمد در آزمایشات PCR خود هستند. دستگاه روتورجین 5 کاناله (Rotor-Gene Q 5plex HRM) یک سیستم ریل تایم PCR است که توسط Qiagen ساخته شده است. این ابزاری با کارایی بالا است که برای استفاده در انواع کاربردهای تحقیقاتی، از جمله تجزیه و تحلیل بیان ژن، تشخیص پاتوژن، تجزیه و تحلیل متیلاسیون DNA، ژنوتیپ و اسکن ژن، و تحقیقات miRNA طراحی شده است.
این دستگاه از یک طراحی چرخشی گریز از مرکز منحصر به فرد برای اطمینان از یکنواختی حرارتی و نوری مطلوب بین نمونه ها استفاده می کند که این ویژگی برای تجزیه و تحلیل PCR بسیار مهم است. هر چاهک یا well در محفظهای از هوای متحرک میچرخد و در طول چرخه حرارتی سریع، تمام نمونهها را دقیقاً در همان دما نگه میدارد. تشخیص به همین ترتیب یکنواخت است. همچنین دستگاه Rotor-Gene Q با طیف گسترده ای از کیت های QIAGEN سازگار است، به این معنی که می توانید از آن برای انواع برنامه های بدون نیاز به بهینه سازی واکنش و شرایط چرخه استفاده کنید. این دستگاه همچنین ویژگی های پیشرفته تجزیه و تحلیل داده ها، از جمله تجزیه و تحلیل منحنی HRM را ارائه می دهد تا به محققان کمک کند نتایج خود را به راحتی تفسیر کنند. علاوه بر این، دستگاه مجهز به طیف وسیعی از ویژگی های کنترل کیفیت داخلی است تا از دقت و قابلیت اطمینان داده های تولید شده اطمینان حاصل کند.
فهرست مطالب
- 1 ویژگی های برتر روتورجین
- 2 تأیید دقت آسان
- 3 کاربردها
- 4 نرمافزار
- 5 پلتفرم Rotor-Gene Q 5plex HRM
- 6 محدوده نوری بینظیر امکان چندین کاربرد را فراهم میکند
- 7 توصیف عمومی دستگاه
- 8 مقایسه مدل های 5 و 6 کاناله
- 9 سوالات متداول دستگاه روتورجین 5 کانال
- 9.1 اگر رنگها یا فلوروفور های جدید در بازار PCR ریل تایم ظاهر شوند، آیا Rotor-Gene Q قادر به اجرای آن رنگها خواهد بود؟
- 9.2 چه حجمی از واکنش برای استفاده در Rotor-Gene Q مناسب است؟
- 9.3 چرا نیاز به نرمالسازی با استفاده از نرمافزار Rotor-Gene ScreenClust HRM دارم؟
- 9.4 آیا برای دستیابی به نتایج قابل تکرار نیاز به یک رنگ مرجع داخلی غیرفعال، مانند ROX، در Rotor-Gene Q است؟
- 9.5 چرا در اجرای من سیگنال فلورسانس تشخیص داده نمیشود؟
- 9.6 چند خوانش سیگنال در طول کسب دادههای زمان واقعی بر روی Rotor-Gene Q انجام میشود؟
- 9.7 چه نوع ظروف واکنش برای استفاده در Rotor-Gene Q مورد نیاز است؟
- 9.8 چند نمونه میتوانند به صورت موازی با دستگاه PCR واقعی Rotor-Gene Q اجرا شوند؟
- 9.9 مقدار آستانه نمودار لگاریتمی (Ct) برای Rotor-Gene Q چگونه تعیین میشود؟
- 9.10 آیا کالیبراسیون منظم برای دستگاه Rotor-gene نیاز است؟
ویژگی های برتر روتورجین
حداقل نیاز به نگهداری؛ حداکثر راحتی
دستگاه Rotor-Gene Q 5plex HRM به گونهای طراحی شده است که نیاز به نگهداری را کاهش داده و سهولت استفاده را به حداکثر برساند. این امر باعث صرفهجویی در زمان و هزینهها شده و دستگاه را برای آزمایشهای پیوسته عملیاتی نگه میدارد. استحکام برجسته فناوری Rotor-Gene در چندین هزار نصب در سراسر جهان اثبات شده است.
ویژگیهای راحت دستگاه Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM شامل:
- ضمانت مادامالعمر بر روی LEDهای بسیار پایدار، بدون نیاز به تعویض لامپهای گرانقیمت و وقتگیر و بدون کاهش تدریجی عملکرد
- تأیید دقت دمایی مقرونبهصرفه و آسان
- عدم نیاز به کالیبراسیون نوری در هنگام نصب یا جابجایی دستگاه
- اتصال “پلاگ و پلی” بین کامپیوتر و دستگاه
- عدم نیاز به تمیز کردن بلوک نمونه
- عدم ایجاد تراکم یا حباب در واکنش به دلیل چرخش
- دستگاه کوچک، سبک و مستحکم – به سادگی آن را در جایی که میخواهید قرار دهید
تأیید دقت آسان
آزمایشگاههای معتبر اغلب میخواهند دقت حرارتی را تأیید کنند. برای بیشتر سایکلرها، این معمولاً نیاز به تعامل با مهندس خدمات دارد. با Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM، این امر ضروری نیست. در عوض، کیت Rotor-Disc OTV (تأیید دمای نوری) که مقرونبهصرفه و آسان برای استفاده است، آزمون دقت دما را خودکار میکند. کل فرآیند کمتر از 30 دقیقه طول میکشد و میتواند توسط هر کاربری انجام شود.
کاربردها
دستگاه Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM برای استفاده در تشخیص در شرایط آزمایشگاهی طراحی شده است. دستگاه Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM باید فقط در ترکیب با کیتهای QIAGEN که برای استفاده با دستگاه Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM مشخص شدهاند و برای کاربردهایی که در دفترچههای کیت QIAGEN توصیف شدهاند، استفاده شود.
نرمافزار
نرمافزار امکان کمیسازی و افزایش امنیت دادهها را فراهم میکند- نرمافزار کاربرپسند، سادگی را برای کاربر روتین فراهم میکند، همچنین یک پلتفرم باز برای توسعهدهنده پیشرفتهتر است. استانداردسازی در آزمایشگاه شما توسط جادوگران نرمافزار، الگوهای ران، پردازش و تجزیه و تحلیل، و فرمتهای گزارش پیشفرض مختلف پشتیبانی میشود. امنیت دادهها، از شروع ران تا صدور نتایج، با مسیرهای حسابرسی، امضاهای دیجیتال و مدیریت کاربران فردی تضمین میشود. هر دستگاه Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM با یک مجوز نرمافزاری نامحدود برای موسسه شما عرضه میشود که به شما امکان میدهد نتایج آزمایش خود را در تعداد زیادی کامپیوتر – در آزمایشگاه یا در دفتر – دسترسی و تجزیه و تحلیل کنید.
پلتفرم Rotor-Gene Q 5plex HRM
طراحی چرخشی گریز از مرکز منحصر به فرد دستگاه Rotor-Gene Q آن را به دقیقترین و متنوعترین سایکلر PCR در زمان واقعی موجود تبدیل کرده است. هر استریپ در یک محفظه هوای در حال حرکت میچرخد، و تمام نمونهها را در طی سیکلهای حرارتی سریع، در دمایی کاملاً یکسان نگه میدارد. تشخیص نیز به همین صورت یکنواخت است. هنگامی که هر لوله با اپتیکهای تشخیص هماهنگ میشود، نمونه روشن شده و سیگنال فلورسانس به سرعت از یک مسیر نوری کوتاه جمعآوری میشود.
این یکنواختی حرارتی و نوری منجر به تحلیل PCR در زمان واقعی حساس، دقیق و سریع میشود. این ویژگی همچنین باعث حذف تغییرات نمونه به نمونه و اثرات لبهای میشود. این مشکلات در دستگاههای سنتی مبتنی بر بلوک به دلیل گرادیان دما در سراسر بلوک و مسیرهای نوری متعدد و پیچیده، اجتنابناپذیر هستند. طراحی چرخشی دقت حرارتی بین استریپ ها را با ±0.02 درجه سانتیگراد ارائه میدهد، تشخیص یکنواخت را بدون نیاز به رنگ مرجع ROX تضمین میکند، زمانهای رمپ سریع و تعادل ناچیز را برای زمانهای اجرای کوتاه فراهم میآورد و اطمینان کامل به نتایج شما را فراهم میکند.
محدوده نوری بینظیر امکان چندین کاربرد را فراهم میکند
چه آزمایش شما بر اساس رنگهای اینترکالاسیون مانند SYBR Green باشد، چه پروبهایی مانند هیدرولیز (TaqMan)، هیبریداسیون (FRET)، پروبهای Scorpion یا شیمیهای مولتیپلکس دیگر، دستگاه Rotor-Gene Q نیازهای شما را برآورده میکند. با داشتن تا 6 کانال که طول موجهای UV تا مادون قرمز را پوشش میدهند، این سایکلر گستردهترین محدوده نوری موجود را ارائه میدهد. علاوه بر این، نرمافزار به شما امکان میدهد تا ترکیبهای جدید طول موج تحریک/تشخیص ایجاد کنید، به این معنی که دستگاه Rotor-Gene Q با رنگهایی که ممکن است در آینده استفاده کنید، سازگار است.
طراحی چرخشی منحصر به فرد دستگاه Rotor-Gene Q 5plex HRM یکنواختی حرارتی و نوری بهینه را بین نمونهها تضمین میکند که برای تحلیل دقیق و قابل اطمینان حیاتی است. هر لوله در یک محفظه هوای در حال حرکت میچرخد، و تمام نمونهها را در طی سیکلهای حرارتی سریع، در دمایی کاملاً یکسان نگه میدارد. تشخیص نیز به همین صورت یکنواخت است. هنگامی که هر لوله با اپتیکهای تشخیص هماهنگ میشود، نمونه روشن شده و سیگنال فلورسانس به سرعت از یک مسیر نوری کوتاه جمعآوری میشود. این یکنواختی حرارتی و نوری منجر به تحلیل PCR در زمان واقعی حساس، دقیق و سریع میشود. طراحی چرخشی تا 20 برابر دقت حرارتی بهتری در سیکلسازی زمان واقعی نسبت به دستگاههای سنتی مبتنی بر بلوک ارائه میدهد. با استفاده از فناوری چرخشی بسیار دقیق، اطمینان کامل به آزمایش PCR در زمان واقعی خود داشته باشید.
توصیف عمومی دستگاه
روتورژن Q یک دستگاه نوآورانه است که امکان PCR زمانواقعی با دقت بالا، PCR نقطهای پایانی، و تجزیه و تحلیل ذوب با وضوح بالا (HRM) را فراهم میآورد. این دستگاه برای استفاده در تحلیل بیان ژن، ژنوتایپینگ، تشخیص عوامل بیماریزا و بسیاری از زمینههای دیگر تحقیق بسیار مناسب است. نرمافزار قدرتمند و کاربرپسند این دستگاه، سادگی را برای تازهکاران فراهم میکند و همچنین یک بستر آزمایشی باز را برای کاربران پیشرفته ارائه میدهد.
مشخصات فنی
کانال ها: مدل 5plex شامل پنج کانال فلورسانس است که امکان شناسایی چندین هدف را در یک لوله واحد فراهم می کند. قابلیت HRM: تجزیه و تحلیل ذوب با وضوح بالا امکان تمایز حتی تفاوت های کوچک در توالی اسید نوکلئیک را فراهم می کند، که برای تجزیه و تحلیل ژنتیکی دقیق ضروری است. محدوده حرارتی: به طور معمول، چنین سیستمهایی میتوانند دمایی از محیط تا ۹۹ درجه سانتیگراد را با نرخ گرمایش و سرمایش سریع ایجاد کنند. نرمافزار: شامل نرمافزار تخصصی برای جمعآوری دادهها، تجزیه و تحلیل HRM و سایر آنالیزهای کمی پیشرفته PCR است. وضوح منحنی ذوب: 0.1 درجه سانتیگراد. سرعت اکتساب داده: تا 400 بار در ثانیه. سطح نویز: کم (نسبت سیگنال به نویز بالا را تضمین می کند).
کارایی حرارتی
روتورژن Q از طراحی پیشرفته گرمایشی و خنککننده استفاده میکند تا شرایط واکنش بهینهای را فراهم آورد. فرمت چرخشی منحصر به فرد آن، اطمینان از یکنواختی حرارتی و نوری بین نمونهها را تضمین میکند که برای تجزیه و تحلیل دقیق و قابل اعتماد حیاتی است. نمونهها در طول اجرا به طور مداوم با سرعت ۴۰۰ دور در دقیقه میچرخند. عملیات سانتریفیوژ مانع از تراکم و از بین بردن حبابهای هوا میشود، اما DNA را به پلت تبدیل نمیکند. علاوه بر این، نیازی نیست که نمونهها قبل از اجرا سانتریفوژ شوند. نمونهها در فری با جرم کم و هوایی گرم و سرد میشوند. گرمایش توسط عنصر نیکل-کروم در درب دستگاه انجام میشود. خنککنندهی محفظه با دمیدن هوای محیط از پایه و خروج هوا از بالای محفظه صورت میپذیرد.
ویژگی های مثبت
راندمان مالتی پلکسی: با اجازه دادن به تجزیه و تحلیل حداکثر پنج هدف مختلف به طور همزمان، باعث صرفه جویی در زمان و معرف ها می شود و خطاهای بالقوه رسیدگی به نمونه را کاهش می دهد. حساسیت و ویژگی بالا: طراحی چرخشی دستگاه گرمایش و سرمایش نمونه یکنواخت را تضمین می کند، شرایط واکنش را بهبود می بخشد و در نتیجه تقویت بسیار حساس و خاص را به همراه دارد. تجزیه و تحلیل HRM: قابلیت های پیشرفته HRM را ارائه می دهد، بینش های دقیقی را در مورد تغییرات ژنتیکی ارائه می دهد، که برای تجزیه و تحلیل ژنتیکی با وضوح بالا، تشخیص جهش و مطالعات اپی ژنتیک بسیار مهم هستند. عملکرد حرارتی و نوری فوقالعاده: طراحی گریز از مرکز، دمای نمونه و تشخیص فلورسانس را در تمام چاهک ها تضمین میکند که منجر به نتایج دقیق و قابل اعتماد میشود. انعطاف پذیری: سازگار با فلوروفورهای مختلف و طیف گسترده ای از کیت های QIAGEN. رمپ سریع: برای آزمایشهای سریعتر به نرخهای شیبدار سریع دست مییابد. نرم افزار کاربر پسند: نرم افزار Rotor-Gene Q راه اندازی آزمایش، تجزیه و تحلیل داده ها و گزارش را ساده می کند.
ویژگی های منفی
هزینه: ویژگی های سطح بالا مانند تجزیه و تحلیل HRM باعث می شود که Rotor-Gene Q 5plex HRM عموماً از نظر سرمایه گذاری اولیه و هزینه های عملیاتی در مقایسه با سیستم های ساده تر گران تر شود. پیچیدگی: قابلیتهای پیشرفته ممکن است به منحنی یادگیری تندتر و درک پیچیدهتر از سختافزار و نرمافزار نیاز داشته باشد، که ممکن است مانعی برای کاربران جدید یا آزمایشگاههای کمتر مجهز به فناوری باشد. محدودیتهای توان عملیاتی: اگرچه برای نیازهای بازده متوسط کارآمد است، اما اندازههای نمونه بزرگتر ممکن است همچنان به اجراهای اضافی یا سیستمهای مختلف با ظرفیتهای توان بالاتر نیاز داشته باشند.
مقایسه مدل های 5 و 6 کاناله
مدلهای 5 کاناله: Rotor-Gene Q 5plex HRM یکی از مدلهای 5 کانالی است که معمولاً برای اکثر نیازهای تحقیقاتی و تشخیصی کافی است و تعادل خوبی بین قابلیتهای مالتی پلکس و هزینه ارائه میدهد. همان عملکردهای اصلی مدل های 5 کاناله سایر سازندگان را ارائه می دهد. با این حال، عملکرد حرارتی و نوری برتر به دلیل طراحی چرخشی ممکن است یک مزیت باشد.
در مقایسه با مدل های 6 کاناله، 5plex HRM یک کانال کمتر برای مالتی پلکس شدن فراهم می کند. این می تواند برای برنامه هایی که نیاز به تجزیه و تحلیل تعداد بیشتری از اهداف به طور همزمان دارند، یک اشکال باشد. با این حال، برای سنجش های ساده تر با 5 هدف یا کمتر، 5plex HRM ممکن است گزینه مقرون به صرفه تری باشد. مدل های 6 کاناله: افزودن یک کانال اضافی امکان مالتی پلکس شدن حتی گسترده تر را فراهم می کند. این می تواند در مطالعات پیچیده ژنتیکی که در آن چندین هدف ژنی باید به طور همزمان تجزیه و تحلیل شوند، مفید باشد. با این حال، افزایش کانال ها معمولاً با قیمت بالاتر و احتمالاً نیازهای تحلیل داده پیچیده تر همراه است.
توجه: کیتهای QIAGEN برای استفاده با دستگاههای Rotor-Gene Q طراحی شدهاند و با توجه به برخی رنگها بهینهسازی شدهاند.
نرمافزار دستگاه
اجراهای جدید را میتوان با استفاده از ابزار شروع سریع یا ابزار پیشرفته تنظیم کرد که هنگام راهاندازی نرمافزار نمایان میشوند. ابزار شروع سریع به گونهای طراحی شده است تا کاربر بتواند به سرعت شروع به اجرا کند. ابزار پیشرفته امکانات بیشتری را فراهم میآورد، مانند تنظیم بهینهسازی سود و تنظیمات حجم. برای راحتی، این ابزارها دارای تعدادی قالب با شرایط چرخهای پیشفرض و کانالهای کسب هستند. برای تغییر نوع ابزار، برگه مناسب را در بالای پنجره «اجرای جدید» انتخاب کنید. ابزار شروع سریع ابزار شروع سریع به کاربر امکان میدهد تا به سرعت شروع به اجرا کند. کاربر میتواند از مجموعهای از قالبهای معمول استفاده کند و حداقل پارامترها را برای شروع وارد کند. ابزار شروع سریع فرض میکند که حجم واکنش ۲۵ میکرولیتر است. برای حجمهای واکنش دیگر، از ابزار پیشرفته استفاده کنید. به عنوان گام اول، قالب مورد نظر برای اجرا را با دوبار کلیک روی قالب از لیست در پنجره «اجرای جدید» انتخاب کنید.
اجرای آخرین دستورالعمل: «اجرای آخرین دستورالعمل» از پروفایلهای چرخشی، اکتسابی و تعریفهای نمونه از آخرین اجرا که در نرمافزار باز است استفاده میکند. سه مرحله با ذوب: این یک پروفایل چرخشی سه مرحلهای است و یک منحنی ذوب با اکتساب دادهها در کانال سبز. دو مرحله: این یک پروفایل چرخشی دو مرحلهای است با دادههای اکتسابی در کانالهای سبز، زرد، نارنجی و قرمز.
FRET خاموش: این یک پروفایل چرخشی سه مرحلهای و یک منحنی ذوب است. برخلاف سه مرحله با ذوب، اکتساب در پایان مرحله آنیل انجام میشود. اندازهگیری غلظت اسید نوکلئیک: این یک قالب پیشفرض برای اندازهگیری غلظت اسید نوکلئیک با استفاده از رنگهای درهمشونده است.
HRM: این پوشه شامل پروفایلهای ذوب با رزولوشن بالا است. اجراهای دیگر: این پوشه شامل پروفایلهای اضافی است. پروفایلهای چرخشی و اکتسابی برای همه قالبها میتوانند با استفاده از ابزار تغییر کنند.
توجه: قالبهای تعریفشده توسط کاربر میتوانند به لیست قالب در ابزار شروع سریع اضافه شوند با کپی یا ذخیرهسازی فایلهای *.ret به مسیر C:\Program Files\Rotor-Gene Q Software\Templates\Quick Start Templates. پس از کپی کردن یک فایل به این مسیر، قالب به صورت یک نماد در لیست ظاهر میشود. اگر میخواهید برای قالبهای خود نمادهای سفارشی ایجاد کنید، یک تصویر *.ico با همان نام فایل قالب بسازید.زیرپوشهها میتوانند ایجاد شوند تا قالبهای مرتبط را گروهبندی کنند. این امکان سازماندهی قالبها را فراهم میکند که میتواند مناسب باشد اگر، به عنوان مثال، چندین کاربر از یک دستگاه استفاده میکنند.
انتخاب روتور
در پنجره بعدی، نوع روتور را از لیست انتخاب کنید. گزینه «حلقه قفل شده متصل است» را علامت بزنید و سپس بر روی «بعدی» کلیک کنید.
تأیید پروفایل
شرایط چرخش و کانالهای اکتسابی از قالب انتخابی وارد میشوند. این تنظیمات میتوانند با استفاده از پنجره «ویرایش پروفایل» تغییر کنند (بخش 6.2.4 را ببینید). برای آغاز یک اجرا، بر روی دکمه «شروع اجرا» کلیک کنید. همچنین امکان ذخیره قالب قبل از شروع اجرا با کلیک بر روی «ذخیره قالب» وجود دارد.
کارایی
بسیار حساس: تفاوت های کوچک در منحنی های ذوب DNA را تشخیص می دهد و امکان تعیین ژنوتیپ دقیق، تجزیه و تحلیل جهش و مطالعات بیان ژن را فراهم می کند. کنترل دقیق دما: تقویت ثابت و یکنواخت را در تمام نمونه ها تضمین می کند که منجر به کمی سازی قابل اعتماد می شود. سرعت رمپ سریع: زمان کلی آزمایش را در مقایسه با روش های PCR سنتی کاهش می دهد. محدوده دینامیکی گسترده: طیف وسیعی از غلظت های هدف را در یک آزمایش تشخیص می دهد.
نگاه کلی
Rotor-Gene Q 5 Plex HRM به ویژه در شرایطی که تجزیه و تحلیل ژنتیکی دقیق به طور مکرر مورد نیاز است، مورد توجه قرار می گیرد و ویژگی های پیشرفته را با کارایی عملیاتی متعادل می کند. با این حال، برای مطالعات در مقیاس بزرگتر یا برنامه های کاربردی ساده تر، مدل های جایگزین ممکن است نسبت به هزینه، عملکرد بهتری را ارائه دهند. جهت دریافت مشاوره و خرید انواع دستگاه های ریل تایم PCR با مشاوران ما در ماناتک تماس حاصل فرمایید.
جدول مشخصات دستگاه
Feature | Specification |
Technology |
Real-time PCR with High-Resolution Melt (HRM) analysis
|
Format |
Centrifugal rotary
|
Number of Channels |
5 (Green, Yellow, Orange, Red, Crimson) + 1 HRM channel
|
Sample Capacity | 96 wells |
Compatible Reaction Volume | 10 µL – 20 µL |
Temperature Range |
Ambient + 4°C to 105°C
|
Ramp Rate | Up to 5°C/sec |
Fluorescence Detection |
FAM, SYBR Green I, ROX, VIC/HEX, Cy5
|
Software |
Rotor-Gene Q software for experiment setup, data analysis, and reporting
|
Dimensions (W x D x H) |
38.1 cm x 47.6 cm x 32.3 cm (14.9″ x 18.7″ x 12.7″)
|
Weight |
Approx. 28 kg (61.7 lb)
|
Applications |
Gene expression analysis, pathogen detection, DNA methylation analysis, genotyping and gene scanning, miRNA research
|
Compatible Kits |
Wide variety of QIAGEN real-time PCR kits
|
Estimated Cost |
$15,000 – $20,000 USD
|
Sources | http://www.biogemservice.it/Available%20Equipment/filepdf/The%20Rotor.pdf |
Maryam shadkam –
کارایی این دستگاه چیه و چه کاربردهایی داره نسبت به بقیه ریل تایم ها؟
مهلا شهریاری –
دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM یک ترموسایکلر مبتنی بر تکنولوژی PCR (واکنش زنجیرهای پلیمراز) است که به منظور تشخیص و تحلیل تفاوتهای ژنتیکی با استفاده از روشهای High-Resolution Melt (HRM) استفاده میشود. این دستگاه به صورت اختصاصی برای تشخیص جهشهای ژنتیکی، تجزیه و تحلیل متیلاسیون، تایپینگ SNP (پلیمورفیسمهای تکنوکلئوتیدی) و تعیین توالی DNA به کار میرود.
آزاده رحمانی –
سلام ممکنه توضیح بدید که روش HRM چیه و چه کاربردی داره؟
مهلا شهریاری –
سلام
روش HRM (High-Resolution Melt) یک تکنیک برای تجزیه و تحلیل تفاوتهای ژنتیکی است که بر پایه ذوب شدن DNA دو رشتهای پس از تکثیر با PCR استوار است. این روش با تحلیل دقیق الگوهای ذوب شدن DNA، تغییرات ژنتیکی کوچک مانند جهشهای نقطهای و تفاوتهای کوچک در توالی DNA را شناسایی میکند. مزایای روش HRM شامل حساسیت بالا، دقت زیاد، سرعت عمل و عدم نیاز به استفاده از پروبهای فلورسنت خاص است.
زهرا اصل روستا –
سلام
میشه بفرمایید این دستگاه دقت و حساسیت بالایی در تشخیص جهشهای ژنتیکی داره یا نه ؟
مهلا شهریاری –
دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM با استفاده از سیستم نوری پیشرفته و تکنولوژی کنترل دمای بسیار دقیق، قابلیت تحلیل دقیقتر و حساستری از الگوهای ذوب شدن DNA دارد. این دستگاه قادر است تغییرات دمایی بسیار کوچک را تشخیص داده و به دقت تغییرات در توالی DNA را مشخص کند. علاوه بر این، سیستمهای تشخیص فلورسنت چندکاناله این دستگاه امکان تحلیل همزمان چندین نمونه را فراهم میکند که به افزایش دقت و حساسیت نتایج کمک میکند.
maryam rezaee –
میشه بگید چه عواملی میتونه روی دقت نتایج تأثیر بگذاره؟
مهلا شهریاری –
عواملی که میتوانند بر دقت نتایج حاصل از دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM تأثیر بگذارند شامل کیفیت و خلوص نمونه DNA، شرایط دقیق اجرای PCR، دقت تنظیمات دستگاه، و همچنین انتخاب صحیح رنگهای فلورسنت برای تجزیه و تحلیل است. همچنین، رعایت دقیق پروتکلهای آزمایشگاهی و کالیبراسیون دورهای دستگاه نیز برای حفظ دقت و صحت نتایج ضروری است.
مریم امیدوار پناه –
میشه از این دستگاه برای متیلاسیون هم استفاده کرد>؟؟
مهلا شهریاری –
سلام
برای تحلیل متیلاسیون DNA با استفاده از دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM، ابتدا باید نمونه DNA تحت درمان بیسولفیت قرار گیرد تا سایتهای متیله و غیرمتیله تمایز یابند. سپس با استفاده از پرایمرهای خاص و تکنیک PCR، نواحی مورد نظر تکثیر شده و تغییرات متیلاسیون در الگوی ذوب شدن DNA مشخص میشود. با تحلیل منحنیهای ذوب شدن، میتوان تفاوتهای متیلاسیون در نمونههای مختلف را شناسایی و مقایسه کرد.
نسیم زینعلی –
سلام وقت بخیر
میشه بگید که تفاوت بین Rotor Gene-Q 5Plex HRM و دستگاههای PCR معمولی چیه؟
مهلا شهریاری –
سلام وقت بخیر
تفاوت اصلی بین Rotor Gene-Q 5Plex HRM و دستگاههای PCR معمولی در توانایی این دستگاه برای انجام تحلیلهای HRM و دقت بالای کنترل دما و تشخیص فلورسنت است. در حالی که دستگاههای PCR معمولی برای تکثیر DNA استفاده میشوند، Rotor Gene-Q 5Plex HRM قابلیت تحلیل دقیقتر و حساستری از الگوهای ذوب شدن DNA دارد که برای تشخیص جهشهای نقطهای، پلیمورفیسمها و تحلیل متیلاسیون مورد نیاز است. همچنین، سیستم نوری پیشرفته و توانایی کار با چندین کانال فلورسنت به طور همزمان از ویژگیهای منحصر به فرد این دستگاه است.
حدیثه دلیریان –
چطوری نتایج رو با این دستگاه میشه تفسیر کرد؟
مهلا شهریاری –
سلام
نتایج حاصل از Rotor Gene-Q 5Plex HRM به صورت منحنیهای ذوب شدن DNA نمایش داده میشود. هر جهش یا تغییر در توالی DNA منجر به تغییر در دمای ذوب شدن و الگوی منحنی میشود. با مقایسه منحنیهای نمونههای مختلف، میتوان تفاوتهای ژنتیکی و جهشها را شناسایی کرد. تحلیل دقیق این منحنیها با استفاده از نرمافزارهای تخصصی که همراه دستگاه ارائه میشود، امکانپذیر است.
دکتر اصلانی مهر –
وقت شما بخیر
چه نوع نمونههایی را میتوان با دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM تحلیل کرد؟
مهلا شهریاری –
سلام دوست عزیز
دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM قابلیت تحلیل انواع مختلف نمونههای DNA را دارد، از جمله DNA استخراج شده از خون، بافتها، سلولها، نمونههای گیاهی و میکروبی. همچنین، میتوان از این دستگاه برای تحلیل RNA پس از تبدیل به cDNA با استفاده از تکنیک RT-PCR استفاده کرد.
حامد مسلم نژاد –
چه نرمافزارهایی برای تحلیل دادههای Rotor Gene-Q 5Plex HRM استفاده میشود؟
مهلا شهریاری –
سلام
دادههای حاصل از دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM با استفاده از نرمافزارهای اختصاصی مانند Rotor-Gene Q Software تحلیل میشوند. این نرمافزارها ابزارهای متعددی برای تحلیل منحنیهای ذوب شدن، مقایسه نمونهها، و تجزیه و تحلیل دادههای کمی و کیفی PCR فراهم میکنند. همچنین، نرمافزارها قابلیت صادرات دادهها به فرمتهای مختلف برای تحلیل بیشتر را نیز دارند.
دکتر شالیزان –
چگونه میتوان دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM را کالیبره کرد؟
مهلا شهریاری –
سلام
کالیبراسیون دستگاه Rotor Gene-Q 5Plex HRM شامل تنظیم و تأیید دقت سیستم نوری، کنترل دما و صحت عملکرد دستگاه است. برای کالیبراسیون، معمولاً از استانداردهای فلورسنت و نمونههای کالیبراسیون خاص استفاده میشود. کالیبراسیون باید به طور منظم و بر اساس توصیههای سازنده انجام شود تا دقت و صحت نتایج حفظ شود. همچنین، انجام آزمایشهای کنترل کیفی داخلی و بررسی مداوم عملکرد دستگاه نیز بخشی از فرآیند کالیبراسیون است.