مستر میکس پروب ریل تایم Probe Master Mix

لطفا برای تکمیل این فرم، جاوا اسکریپت را در مرورگر خود فعال کنید.

برای دریافت نمونه این محصول شماره همراه خود را وارد کنید *

نام آزمایشگاه/ مرکز تحقیقاتی *

ارسال

بهترین انتخاب مستر میکس پروب

همان طور که از نام آن پیداست، “مستر میکس پروب” (Probe Master Mix) یک محلول آماده و ترکیبی است که حاوی تمامی اجزای لازم (به جز نمونه DNA/RNA و پروب) برای انجام یک واکنش PCR (واکنش زنجیره‌ای پلیمراز) مبتنی بر پروب، به ویژه Real-Time PCR (RT-PCR) است. این مستر میکس‌ها به گونه‌ای طراحی شده‌اند که کارایی، دقت و تکرارپذیری آزمایش‌های مولکولی را افزایش دهند.

برای درک بهتر مستر میکس پروب، ابتدا باید با Real-Time PCR (qPCR) و نقش پروب‌ها آشنا شویم.

دانلود بروشور مسترمیکس Probe

مروری بر Real-Time PCR (qPCR):

Real-Time PCR یک روش مولکولی قدرتمند برای تکثیر و اندازه‌گیری همزمان مقدار DNA یا RNA هدف در یک نمونه است. برخلاف PCR معمولی که محصول نهایی در پایان واکنش اندازه‌گیری می‌شود، در qPCR، تکثیر DNA/RNA در هر چرخه در زمان واقعی (real-time) پایش می‌شود. این پایش معمولاً با استفاده از رنگ‌های فلورسنت یا پروب‌های فلورسنت صورت می‌گیرد.

نقش پروب‌ها در Real-Time PCR:

پروب‌ها (Probes) قطعات کوچکی از DNA یا RNA هستند که به صورت اختصاصی به توالی هدف در DNA/RNA تکثیر شده متصل می‌شوند. ویژگی اصلی پروب‌ها در Real-Time PCR این است که آن‌ها با مولکول‌های فلورسنت نشان‌گذاری شده‌اند. رایج‌ترین نوع پروب‌ها، پروب‌های TaqMan هستند که دارای دو نشانگر فلورسنت در دو انتهای خود می‌باشند:

1. رپورتر (Reporter): یک مولکول فلورسنت که در انتهای ‘۵ پروب قرار دارد.
2. کوئنچر (Quencher): یک مولکول که در نزدیکی رپورتر قرار گرفته و در حالت عادی (وقتی پروب دست‌نخورده است) فلورسانس رپورتر را خاموش (quench) می‌کند.

هنگامی که پروب به DNA هدف متصل می‌شود و آنزیم DNA پلیمراز (معمولاً Taq پلیمراز) در حال تکثیر رشته است، فعالیت اگزونوکلئازی ‘۵ به ‘۳ پلیمراز باعث هیدرولیز و شکستن پروب می‌شود. این شکستن، رپورتر را از کوئنچر جدا می‌کند و در نتیجه، رپورتر شروع به تابش فلورسانس می‌کند. با هر چرخه تکثیر، تعداد مولکول‌های فلورسنت افزایش یافته و دستگاه Real-Time PCR این سیگنال را رصد می‌کند. میزان فلورسانس متناسب با مقدار DNA/RNA اولیه در نمونه است.

اجزای تشکیل‌دهنده یک مستر میکس پروب (Probe Master Mix):

یک مستر میکس پروب به طور معمول شامل اجزای زیر است که به صورت بهینه و در غلظت‌های مناسب با هم ترکیب شده‌اند:

1. آنزیم DNA پلیمراز (DNA Polymerase): معمولاً یک آنزیم Taq پلیمراز مقاوم به حرارت با فعالیت اگزونوکلئازی ‘۵ به ‘۳ (برای هیدرولیز پروب) است. این آنزیم مسئول تکثیر DNA است.
2. dNTPs (Deoxynucleotide Triphosphates): بلوک‌های ساختمانی DNA (شامل dATP, dCTP, dGTP, dTTP) که برای ساخت رشته‌های جدید DNA توسط پلیمراز مورد نیاز هستند.
3. بافر واکنش (Reaction Buffer): محلولی که pH و غلظت یون‌های مناسب را برای عملکرد بهینه آنزیم و سایر اجزا فراهم می‌کند. این بافر معمولاً شامل Tris-HCl و KCl است.
4. یون منیزیم (Mg2+): معمولاً به شکل یون‌های منیزیم کوفاکتورهای ضروری برای فعالیت آنزیم DNA پلیمراز هستند.
5. سایر افزودنی‌ها (Additives): ممکن است شامل مواد تثبیت‌کننده آنزیم، مواد کاهنده اثرات بازدارنده نمونه (inhibitors)، یا مواد افزودنی برای افزایش کارایی PCR مانند گلیسرول یا DMSO باشد.
6. رنگ مرجع (Reference Dye) یا فلوروفور مرجع (Reference Fluorophore): در برخی از مستر میکس‌ها، یک رنگ فلورسنت پایدار مانند ROX (برای نرمال‌سازی سیگنال‌های فلورسنت و جبران نوسانات ناشی از دستگاه یا تغییرات حجم واکنش) وجود دارد. این رنگ به پایداری سیگنال کمک می‌کند.

هدف از استفاده از مستر میکس پروب:

• کاهش خطای انسانی: با ترکیب کردن تمامی اجزا در یک محلول، نیاز به پیپت کردن چندین جزء به صورت جداگانه از بین می‌رود. این کار احتمال خطا در اندازه‌گیری حجم‌ها و آلودگی نمونه‌ها را به شدت کاهش می‌دهد.
• افزایش تکرارپذیری: به دلیل ترکیب یکنواخت اجزا، نتایج بین واکنش‌ها و بین آزمایشات مختلف از تکرارپذیری بالاتری برخوردارند.
• صرفه‌جویی در زمان: آماده‌سازی واکنش بسیار سریع‌تر انجام می‌شود.
• بهینه‌سازی شده: فرمولاسیون مستر میکس‌ها توسط سازنده برای عملکرد بهینه و حداکثر حساسیت و ویژگی برای واکنش‌های مبتنی بر پروب بهینه‌سازی شده است.
• کاهش آلودگی: کمترین میزان باز شدن درب ویال‌ها و تماس با هوا، خطر آلودگی را به حداقل می‌رساند.

مستر میکس پروب چه نقشی در تست های مولکولی دارد؟

مستر میکس پروب، به خصوص در زمینه تست‌های مولکولی مبتنی بر Real-Time PCR (qPCR)، نقش بسیار حیاتی و محوری ایفا می‌کند. این محلول آماده، با ترکیب هوشمندانه تمام واکنش‌گرهای ضروری، فرآیند تشخیص مولکولی را به طرز چشمگیری ساده‌تر، دقیق‌تر، سریع‌تر و قابل اعتمادتر می‌کند. بیایید به تفصیل به نقش‌های کلیدی آن بپردازیم:

۱. تسهیل و استانداردسازی واکنش PCR

تصور کنید برای هر نمونه‌ای که آزمایش می‌کنید، باید تک تک اجزای واکنش (آنزیم، dNTPs، بافر، یون منیزیم و غیره) را جداگانه و با دقت بالا پیپت کنید. این کار زمان‌بر، مستعد خطا و دشوار است. مستر میکس پروب دقیقاً همین مشکل را حل می‌کند:

• کاهش خطای انسانی: با تجمیع تمام اجزا در یک محلول واحد، نیاز به پیپت کردن چندین معرف مختلف به حداقل می‌رسد. این امر به طور چشمگیری احتمال خطای پیپتینگ و آلودگی نمونه‌ها را کاهش می‌دهد.
• افزایش تکرارپذیری (Reproducibility): هر دوز از مستر میکس حاوی نسبت‌های دقیق و بهینه‌ای از واکنش‌گرها است. این ثبات در ترکیب، تضمین می‌کند که نتایج حاصل از آزمایش‌های متعدد، حتی در زمان‌ها یا توسط افراد مختلف، قابل مقایسه و تکرارپذیر باشند.
• صرفه‌جویی در زمان: آماده‌سازی واکنش بسیار سریع‌تر انجام می‌شود. کافی است مستر میکس را با نمونه، پرایمرها و پروب‌های اختصاصی ترکیب کنید. این موضوع در آزمایشگاه‌هایی که حجم بالایی از نمونه‌ها را پردازش می‌کنند (مانند آزمایشگاه‌های تشخیص کووید-۱۹)، حیاتی است.

۲. بهینه‌سازی عملکرد واکنش و افزایش حساسیت/ویژگی

تولیدکنندگان مستر میکس پروب، ماه‌ها و سال‌ها را صرف بهینه‌سازی فرمولاسیون این محلول‌ها می‌کنند تا حداکثر کارایی و پایداری را ارائه دهند:

• غلظت‌های بهینه واکنش‌گرها: هر جزء (آنزیم، dNTPs، Mg2+، بافر) در غلظتی دقیق و از پیش تعیین‌شده قرار دارد که برای عملکرد حداکثری آنزیم و کمترین تکثیر غیر اختصاصی تنظیم شده است. این بهینه‌سازی دستی، بسیار دشوار و زمان‌بر خواهد بود.
• آنزیم‌های تخصصی: مستر میکس‌ها معمولاً حاوی آنزیم‌های DNA پلیمراز با کیفیت بالا و غالباً با قابلیت “Hot Start” هستند. قابلیت Hot Start از فعالیت آنزیم در دماهای پایین (قبل از شروع چرخه حرارتی PCR) جلوگیری می‌کند. این ویژگی به طور قابل توجهی تکثیر غیر اختصاصی (nonspecific amplification) را کاهش داده و حساسیت و ویژگی (specificity) واکنش را بهبود می‌بخشد.
• افزودنی‌های تثبیت‌کننده و تقویت‌کننده: مستر میکس‌ها ممکن است حاوی مواد افزودنی پنهانی باشند که به تثبیت آنزیم در طول زمان، کاهش اثر بازدارنده‌های موجود در نمونه‌های بیولوژیکی و افزایش کلی کارایی واکنش کمک می‌کنند.
• کنترل کیفیت دقیق: هر بچ از مستر میکس قبل از عرضه به بازار، تحت آزمایش‌های کنترل کیفیت (QC) دقیق قرار می‌گیرد تا عملکرد ثابت و قابل اعتماد آن تضمین شود.

۳. امکان تشخیص و کمی‌سازی در Real-Time PCR

همانطور که قبلاً اشاره شد، مستر میکس پروب به طور خاص برای استفاده با پروب‌های فلورسنت در Real-Time PCR طراحی شده است. این ترکیب امکانات بی‌نظیری را فراهم می‌کند:

• اندازه‌گیری همزمان تکثیر و کمی‌سازی: در Real-Time PCR، سیگنال فلورسنت پروب با هر چرخه تکثیر DNA افزایش می‌یابد. مستر میکس، با فراهم کردن محیط بهینه برای این فرآیند، امکان پایش لحظه‌ای افزایش DNA و در نتیجه کمی‌سازی (quantification) مقدار اولیه DNA/RNA هدف در نمونه را فراهم می‌کند.
• افزایش ویژگی تشخیص: پروب‌ها به توالی‌های بسیار اختصاصی در DNA هدف متصل می‌شوند. این ویژگی (در کنار پرایمرها) باعث می‌شود که Real-Time PCR با استفاده از پروب‌ها، در تشخیص دقیق یک توالی خاص (مثلاً یک ژن ویروسی مشخص یا یک جهش خاص) بسیار قدرتمند باشد.
• کاهش تشخیص‌های مثبت کاذب: با استفاده از پروب، سیگنال فلورسنس تنها زمانی تولید می‌شود که پروب به توالی هدف متصل شده و توسط پلیمراز تجزیه شود. این مکانیسم از ایجاد سیگنال از محصولات غیر اختصاصی یا دیمرهای پرایمر جلوگیری کرده و احتمال مثبت کاذب را به شدت کاهش می‌دهد.

۴. کاربرد در تست‌های مولکولی مختلف

نقش مستر میکس پروب در طیف وسیعی از تست‌های مولکولی حیاتی است:

• تشخیص بیماری‌های عفونی: برجسته‌ترین مثال آن تشخیص ویروس‌ها و باکتری‌ها (مانند SARS-CoV-2، HIV، HCV، HPV و عوامل بیماری‌زای باکتریایی) در نمونه‌های بالینی.
• تشخیص بیان ژن: اندازه‌گیری میزان mRNA یک ژن خاص برای درک فعالیت ژن در شرایط مختلف.
• تشخیص جهش‌ها و واریانت‌ها: شناسایی تغییرات ژنتیکی کوچک که می‌تواند نشان‌دهنده بیماری‌های ژنتیکی، مقاومت به دارو یا انواع پاتوژن باشد.
• تعداد کپی ژن (CNV): اندازه‌گیری تعداد کپی‌های یک ژن خاص در ژنوم، که می‌تواند در تشخیص سرطان یا بیماری‌های ژنتیکی ارثی کاربرد داشته باشد.
• کنترل کیفیت در صنایع داروسازی و غذایی: شناسایی آلودگی‌های میکروبی یا تغییرات ژنتیکی

در مجموع، مستر میکس پروب نه تنها یک محلول شیمیایی، بلکه یک عامل توانمندساز در دنیای بیولوژی مولکولی است. این محصول با ساده‌سازی، استانداردسازی و بهینه‌سازی فرآیندهای پیچیده PCR، به دانشمندان و تشخیص‌گران امکان می‌دهد تا با سرعت، دقت و اطمینان بیشتری به اطلاعات ژنتیکی دست یابند و در نهایت، به پیشرفت‌های مهمی در پزشکی، تحقیقات و صنایع مختلف کمک کنند.

یک مستر میکس خوب چه ویژگی هایی باید داشته باشد؟

ویژگی‌های یک مستر میکس پروب عالی

یک مستر میکس پروب خوب، کلید موفقیت و تکرارپذیری در تست‌های مولکولی مبتنی بر Real-Time PCR است. انتخاب یک مستر میکس با کیفیت می‌تواند تفاوت زیادی در دقت، حساسیت و کارایی آزمایش‌های شما ایجاد کند. در اینجا به مهم‌ترین ویژگی‌هایی که یک مستر میکس پروب عالی باید داشته باشد، اشاره می‌کنیم:

۱. حساسیت (Sensitivity) و ویژگی (Specificity) بالا

این دو ویژگی از حیاتی‌ترین عوامل در عملکرد یک مستر میکس هستند:

• حساسیت بالا: یک مستر میکس خوب باید بتواند حتی مقادیر بسیار کم از DNA یا RNA هدف را در نمونه تشخیص دهد. این به معنای تولید سیگنال قوی و قابل اطمینان از حداقل کپی‌های الگوی اولیه است. این ویژگی برای تشخیص زودهنگام بیماری‌ها یا شناسایی عوامل بیماری‌زا با بار ویروسی/باکتریایی کم حیاتی است.
• ویژگی بالا: مستر میکس باید اطمینان دهد که تنها توالی هدف مورد نظر تکثیر و شناسایی می‌شود و هیچ سیگنالی از توالی‌های غیرمرتبط یا نمونه‌های منفی تولید نمی‌شود (کاهش مثبت کاذب). این امر به خصوص با وجود قابلیت Hot Start در آنزیم پلیمراز تقویت می‌شود.

۲. پایداری (Stability) و عمر مفید طولانی

پایداری یک مستر میکس در شرایط نگهداری مختلف و در طول زمان بسیار مهم است:

• پایداری در دماهای مختلف: یک مستر میکس خوب باید حتی پس از چرخه‌های انجماد-ذوب متعدد یا قرار گرفتن در دمای اتاق برای مدت کوتاه (مثلاً هنگام آماده‌سازی واکنش)، پایداری خود را حفظ کند.
• عمر مفید طولانی: تاریخ انقضای طولانی‌مدت به آزمایشگاه‌ها اجازه می‌دهد تا حجم‌های بیشتری را خریداری و ذخیره کنند، بدون اینکه نگران از دست دادن کیفیت در طول زمان باشند. این ویژگی به ویژه برای مستر میکس‌های حاوی آنزیم RT (در Real-Time RT-PCR) که به دما حساس‌تر هستند، اهمیت پیدا می‌کند.

۳. تکرارپذیری (Reproducibility) و دقت (Accuracy)

• نتایج ثابت: یک مستر میکس با کیفیت باید در آزمایش‌های متعدد (حتی در روزهای مختلف یا با بچ‌های مختلف از کیت) نتایج بسیار مشابه و قابل تکراری ارائه دهد. این امر برای اطمینان از اعتبار داده‌ها و قابلیت مقایسه نتایج ضروری است.
• کمی‌سازی دقیق: برای کاربردهای کمی‌سازی (مثل تعیین بار ویروسی)، مستر میکس باید قابلیت تولید سیگنال فلورسانس خطی و قابل پیش‌بینی را در طیف وسیعی از غلظت‌های الگو داشته باشد. این به معنای قابلیت تعیین دقیق و قابل اعتماد مقدار اولیه DNA/RNA هدف است

۴. سازگاری با دستگاه‌های Real-Time PCR مختلف

• سازگاری گسترده: یک مستر میکس خوب باید با طیف وسیعی از دستگاه‌های Real-Time PCR رایج در بازار (مانند دستگاه‌های Thermo Fisher Scientific/Applied Biosystems، Bio-Rad، Roche و غیره) سازگار باشد. این سازگاری اغلب از طریق وجود یا عدم وجود رنگ مرجع ROX (یا سطوح مختلف آن) در مستر میکس تعیین می‌شود، زیرا برخی دستگاه‌ها به این رنگ برای نرمال‌سازی سیگنال نیاز دارند.

۵. سهولت استفاده (Ease of Use)

• محلول آماده: مهم‌ترین ویژگی که نام “مستر میکس” را توجیه می‌کند، آماده بودن آن است. این یعنی تمام اجزا (آنزیم، dNTPs، بافر، Mg2+) از قبل با نسبت‌های بهینه ترکیب شده‌اند و نیاز به پیپت کردن جداگانه ندارند.
• حجم‌های راحت: بسته‌بندی در حجم‌های مناسب برای نیازهای مختلف آزمایشگاه (مثلاً بسته‌های کوچک برای مصرف کم یا بسته‌های بزرگ برای حجم کاری بالا) نیز مهم است.
• محتوای بهینه: ترکیبات به گونه‌ای باشند که حداقل نیاز به تنظیمات دستی (مثلاً افزودن جداگانه MgCl2) وجود داشته باشد.

۶. مقاومت در برابر بازدارنده‌ها (Inhibitor Tolerance)

• تحمل مواد مزاحم: نمونه‌های بیولوژیکی (مثل خون، بزاق، مدفوع) اغلب حاوی موادی هستند که می‌توانند واکنش PCR را مهار کنند (مانند هِم، EDTA، هپارین). یک مستر میکس خوب باید دارای فرمولاسیونی باشد که تا حد امکان در برابر این بازدارنده‌ها مقاوم بوده و همچنان عملکرد بالایی داشته باشد.

۷. حضور قابلیت Hot Start

• افزایش ویژگی: همانطور که پیش‌تر اشاره شد، وجود یک مکانیزم Hot Start در آنزیم DNA پلیمراز (مثلاً از طریق آنتی‌بادی‌ها یا افزودنی‌های شیمیایی) به شدت از تکثیر غیر اختصاصی جلوگیری کرده و ویژگی و حساسیت واکنش را بهبود می‌بخشد. این ویژگی در اکثر مستر میکس‌های پروب با کیفیت بالا وجود دارد.

کیت Probe PCR MasterMix محصولی از برند معتبر Biosiwa است که به‌صورت دو برابر غلیظ (2x Super Probe qPCR Mastermix) طراحی شده و برای انجام واکنش‌های Real-Time PCR با TaqMan Probe و روش Hot Start کاملاً بهینه‌سازی شده است.

این مسترمیکس امکان استفاده در هر دو حالت Fast و Standard را دارد و با انواع دستگاه‌های Rotor-Gene Corbett، MIC، Gentier Tianlong و CFX Bio-Rad سازگار است.

از ویژگی‌های کلیدی این محصول می‌توان به موارد زیر اشاره کرد:

• کارایی و حساسیت بالا در واکنش‌های تقویت ژن

• قابلیت Multiplexing برای تشخیص هم‌زمان چند هدف ژنی

• پایداری طولانی‌مدت در دمای °20- سانتی‌گراد

• زمان واکنش کوتاه (90 تا 120 دقیقه)

• مناسب برای آزمایشگاه‌های تشخیص مولکولی با حجم کاری بالا

این محصول با فرمولاسیون دقیق و کنترل کیفی سخت‌گیرانه تولید شده و توسط شرکت ماناتک در ایران عرضه، پشتیبانی فنی و خدمات پس از فروش آن ارائه می‌شود.

۸. پشتیبانی فنی و اطلاعات محصول کامل

• برگه مشخصات فنی (Technical Data Sheet): یک سازنده معتبر، اطلاعات کاملی در مورد ترکیبات، شرایط نگهداری، پروتکل‌های توصیه شده و سازگاری با دستگاه‌های مختلف را در اختیار کاربران قرار می‌دهد.
• پشتیبانی فنی: دسترسی به تیم پشتیبانی فنی برای پاسخگویی به سوالات و حل مشکلات احتمالی نیز یک مزیت مهم است.

با در نظر گرفتن این ویژگی‌ها، می‌توانید بهترین مستر میکس پروب را برای نیازهای خاص آزمایشگاه و کاربردهای مولکولی خود انتخاب کنید.

ماناتک به عنوان یک شرکت فعال در زمینه تأمین و ارائه محصولات بیوتکنولوژی و آزمایشگاهی در ایران، پشتیبانی‌های فنی لازم برای مستر میکس‌های پروب و سایر محصولات مرتبط را انجام می‌دهد.

ماناتک معمولاً خدمات زیر را در ارتباط با مستر میکس‌های پروب ارائه می‌دهد:

• ارائه اطلاعات کامل محصول
• مشاوره فنی و علمی: ارائه مشاوره تخصصی در مورد انتخاب مستر میکس مناسب بر اساس نوع آزمایش (مثلاً کمی‌سازی، تشخیص، Real-Time RT-PCR)، نوع نمونه، دستگاه Real-Time PCR مورد استفاده و سایر فاکتورهای فنی.
• پشتیبانی در عیب‌یابی (Troubleshooting): در صورت بروز هرگونه مشکل در آزمایش (مانند سیگنال ضعیف، تکثیر غیر اختصاصی، یا نتایج غیرقابل تکرار)، تیم فنی ماناتک می‌تواند به شما در شناسایی و رفع مشکل کمک کند.
• آموزش (در صورت نیاز): ممکن است دوره‌های آموزشی یا راهنمایی‌های عملی برای کاربران جدید یا آزمایشگاه‌هایی که به تازگی شروع به استفاده از مستر میکس‌های پروب می‌کنند، ارائه شود.
• تضمین کیفیت محصول: اطمینان از اینکه محصولاتی که ارائه می‌دهند، از کیفیت بالا و کنترل شده‌ای برخوردار هستند.

این پشتیبانی‌ها برای اطمینان از اینکه کاربران می‌توانند به بهترین شکل از محصولات بهره‌برداری کنند و به نتایج دقیق و قابل اعتمادی دست یابند، بسیار حیاتی هستند. بنابراین، اگر قصد تهیه مستر میکس پروب از ماناتک را دارید، می‌توانید روی پشتیبانی فنی آن‌ها حساب کنید.